Наборы реагентов TSA

Наборы реагентов TSA

TSA (Tyramide Signal Amplification), Тирамидная амплификация сигнала – это оригинальная технология для усиления сигнала. Реагенты TSA увеличивают чувствительность окрашивания маркеров от 10 до 100 раз и подходят для работы с широким спектром исследований.

Области применения:

  • Иммуногистохимия (ИГХ)
  • Иммуноцитохимия (ИЦХ)
  • In situ гибридизация (ISH)

Стандартная флуоресцентная детекция основана на включении прямо меченых флуорохромом антител. Детекция TSA основана на включении в процесс пероксидазы хрена, которая активирует тирамидные остатки, связанные с флуорохромом. Множество активированных тирамидных остатков связываются с субстратом ковалентно в месте локализации фермента. Таким образом, с исследуемым антигеном вместо одной молекулы флуорохрома связываются в 10-100 раз больше, что и дает усиление сигнала.

Для усиления хромогенного окрашивания разработаны реагенты TSA, связанные с ферментом – пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. Вместо одной реакции, происходит в 10 – 100 раз больше реакций, задействуется большее количество субстрата, и это дает усиление сигнала.


Схема детекции с использованием TSA

1.jpg


B - биотин
SA - стрептавидин
DNP - динитрофенол
HRP – пероксидаза хрена


Стандартное включение флуоресцентной метки:

рис 10 стандартная детекция.jpg
Включение флуоресцентной метки с использованием
технологии TSA (Tiramide Signal Amplification):

рис 11 детекция TSA.jpg
Свойства Преимущества
  • Реакция на основе пероксидазы хрена;
  • Точная локализация сигнала;
  • Возможность хромогенной или флуоресцентной детекции;
  • Стабильное ковалентное связывание флуоресцентно
    меченых молекул тирамида с тканью в месте локализации
    молекул-мишеней. Включение стадий TSA в ИГХ,
    ИЦХ и ISH исследование не требует значительных
    изменений стандартного отработанного протокола;
  • Работа с уже имеющимися в лаборатории реактивами.
  • Увеличивает чувствительность от 10 до 100 раз;
  • Высокое разрешение при низком фоновом окрашивании
    (за счет уменьшения концентрации первичных антител
    и уменьшения неспецифического связывания);
  • Снижение расхода антител и себестоимости теста.



Пример 1. Препарат ткани легкого норки, детекция РНК р53

Стандартная ISH:

  • РНК-зонд, меченый дигоксигенином (DIG)
  • Антитела к дигоксигенину, конъюгированные с щелочной
    фосфатазой (anti-DIG-AP)
  • Хромогенная детекция BCIP/NBT
ISH с использованием TSA

  • РНК-зонд, меченый дигоксигенином (DIG)
  • Антитела к дигоксигенину, конъюгированные
    с пероксидазой хрена (anti-DIG-HRP)
  • Амплификация сигнала тирамидом, конъюгированным
    с щелочной фосфатазой (AP)
  • Хромогенная детекция BCIP/NBT
13.jpg 14.jpg



Пример 2. Определение вируса Эпштейна-Барра на препарате ткани лимфомы Ходжкина

Стандартная ИГХ:

  • Антитела Anti-EBV, разведение 1:25
  • Вторичные антитела, конъюгированные с флуорохромом
ИГХ с использованием TSA

  • Антитела Anti-EBV, разведение 1:25,000
  • Вторичные антитела, конъюгированные
    с пероксидазой хрена
  • Амплификация сигнала тирамидом, конъюгированным
    с флуорохромом
рис 16.jpg рис 15.jpg


Наборы реагентов TSA Plus для флуоресцентной детекции

Наборы реагентов TSA Plus для хромогенной детекции

Сопутствующие реагенты



*RUO – только для научных исследований


Назад в раздел