BD Cytometric Bead Array (CBA) Analysis Software

Система Cytometric Bead Array – это система для определения цитокинов и других аналитов в биологических жидкостях с использованием мультиплексных технологий анализа (до 6 аналитов одновременно), включающая в себя реагенты, оборудование и программное обеспечение.

В основе СВА-анализа лежит связывание с моноклональными антителами, фиксированными на поверхности микрочастиц. Микрочастицы флюоресциируют в красном диапазоне, для детекции используется тот же фильтр, что и для PerCP. Сочетание микрочастиц с разной интенсивностью флюоресценции позволяет одновременно определять концентрации нескольких аналитов в одной пробе. После связывания аналитов с первыми антителами на поверхности частиц и добавления вторых антител, меченных PE, формируется «сэндвич» как в ИФА. Уровень флюоресценции PE соответствует связыванию исследуемого аналита и тем выше, чем выше концентрация аналита. Проведение измерений образцов проводится с использованием неспециализированного программного обеспечения, такого как CellQuest Pro или BD FACSDiva. В зависимости от выбранного исследования программное обеспечение либо производит количественную оценку концентрации аналитов либо качественный (позитивный/негативный) анализ, основанный на определенных пользователем значениях.

Количественный анализ

Количественный анализ используется для определения концентрации аналитов в файле образца, основываясь на известных значениях концентрации, установленных в файле калибровки. Программа BD CBA обеспечивает количественный анализ до восьми типов частиц.

Для проведения количественного анализа Вы должны провести измерения (в программе CellQuest или BD FACSDiva ) стандартов с известной концентрацией каждого аналита, подготовленного в серийном разведении. Программное обеспечение BD CBA читает файлы данных FCS формата, выделяет популяцию по прямому и боковому светорассеянию (FSC/SSC), и затем создает гистограмму по FL3. Каждый отдельный пик на FL3 гистограмме - один для каждого аналита – определяется значением медианы или среднего интенсивности флюоресценции (MFI).

Программа выполняет трансформацию данных в логарифмические значения, затем сглаживает (аппроксимирует) кривую по точкам, используя либо четырех-парметровую логическую модель, либо логарифмическую модель.

Качественный анализ

Качественный анализ используется для определения субклассов иммуноглобулинов, имеющихся в образце. Файлы формата FCS анализируются в программе СВА, которая представляет значения MIF для FL1(kappa) и FL2 (lambda) и качественный (позитивный или негативный) результат.

Позитивный или негативный результат дает представление о том, выходит ли значение данного образца за границы нормы. Значения границ нормы представляют собой значение MIF нулевых частиц, умноженное на установленное пользователем значение для негативного образца (по умолчанию это значение 3).

Программное обеспечение СВА обеспечивает качественный анализ до 7 типов частиц.




Назад в раздел